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中国代孕网,【高鹰代孕一条龙服务】,支原体

字号+作者:佚名 来源:代孕母亲 2020年07月31日

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中国代孕网,海外代孕机构,高鹰代孕一条龙服务。

  问:在用qEP做支原体检测的时候,加入内控对照品,在仪器设置上是需要选择两个通道吗?

代怀孕机构

  答:是需要2个通道,一个FAM, 一个HEX,HEX是对应内控的通道。

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  问:我想问一下,7500仪器里面没有HEX这个通道选项,可以用哪个通道代替呢?

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  答:7500这款是没有HEX荧光标识,不过问过厂家,说7500有VIC,可以用VIC通道。

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  问:qPCR结果判定中,FAM positive,HEX irrelevant中这个不相关是具体指什么?

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  答:这个不相关是指如果FAM是阳性,那么由于扩增时存在竞争性抑制,所以内控是否有扩增,其无关紧要。

  问:在用样品制备试剂盒时,进行支原体DNA提取时,加入内控对照品,实际上是监控在提取操作总是否能够binding支原体DNA,而无法监测这步操作的回收率的,是吗?

  答:“实际上是监控在提取操作总是否能够binding支原体DNA”,可以这么理解,或者说是在监测整个提取过程。我们又问了一下厂家,内控和样品的提取效率是一样的,这样可以反映样品的真实情况,因为只要内控提取后能测出来,那就表明提取是没有问题的。极少量的支原体如10CFU的,通过提取,也是可以检测到的,表明灵敏度是没有问题的。样本Ct值和10CFU的Ct值比较,是可以进行相对定量的。

  问:你们好,我问一下你们这个Venor Gem qEP试剂盒能做放行检测吗?

  答:放行应相当于国外说的release testing, 这个qEP试剂盒是符合国外药典规定的性能,能做放行检测的。同时需注意要做支原体DNA抽提才行,抽提是用另外一个盒子,见厂家的venor gem sample preparation kit。

  问:这个如果是用来检测细胞上清,是不是就不用提取DNA了呢?

  答:只要是跟药典有关,跟临床治疗或制药检验有关,就需要提取DNA。如果仅仅是科研用培养细胞,筛查支原体,则可以不提。

  问:询问qPCR仪器的设置

  答:具体可见MB厂家文件Venor?GeM qEP: Cyclers Programg,可从网站上下载。

  问:被动参比染料是选“none”吧?

  

  答:对,没有ROX,选none

  问:大家好,想咨询一下,咱们支原体DNA提取时所取的样本量是依据什么定的呢,比如,我们有CAR-T细胞,病毒液等,如果CAR-T细胞按细胞数来的话取多少细胞数比较好,或者如果病毒液按体积的话多少体积更佳呢?

  答:支原体 DNA 提取试剂盒可从最多含有 1X 106细胞/ml 的细胞上清中直接分离 DNA,病毒没有要求。总体积最多 200μl。提取的样本就是细胞上清,ATMPs(高级医用药品),细胞培养基等。病毒液应该也是最初来自细胞上清吧。样本量是根据支原体污染量得出的经验值,跟核酸纯化柱上的DNA膜吸附能力有关。

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参考资料

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